Методы гормональной диагностики беременности основаны на обнаружении в моче женщины, у которой подозревается беременность, хориального гонадотропина. Для этой цели предложены различные тест-объекты: мыши, крысы, крольчихи, лягушки и другие животные.
Изменения, которые наступают в яичниках животных под влиянием введенного хориального гонадотропина, обозначают как гипофизарные реакции, причем, по степени выраженности происшедших изменений, различают три гипофизарных реакции. Первая реакция характеризуется наличием зреющих фолликулов со скоплением гранулезных клеток вокруг яйцеклетки. Рога матки увеличены, цианотичны, во влагалищных мазках стадия течки или предтечки. При второй реакции в фолликулах образуются кровоизлияния (кровяные точки), рога матки без изменений, во влагалищных мазках стадия покоя. Для третьей реакции характерно наличие в яичниках желтых тел.
Первая реакция не специфична для беременности, так как она бывает положительной при наличии повышенного количества фолликулостимулирующего гормона гипофиза, когда функция яичников угнетена или полностью выключена, как например, в менопаузе.
Реакция на беременность считается положительной, если положительны вторая и третья реакции. У небеременных женщин эти две реакции бывают отрицательными. Однако нужно иметь в виду, что обе эти реакции положительны (и при том резко!) при пузырном заносе и хорионэпителиоме.
Наиболее распространенными биологическими реакциями являются реакция Ашгейм-Цондека на неполовозрелых самках мышей, реакция на взрослых самках мышей, реакция Фридмана на взрослых самках кролика и сперматозоидная реакция Галли-Майнини на самцах лягушек или жаб.
Реакция Ашгейм-Цондека. Сущность реакции заключается в том, что введенная под кожу неполовозрелым самкам белых мышей моча беременной женщины вызывает у них изменения в половом аппарате, соответствующие второй или третьей гипофизарной реакции. Моча небеременной женщины таких изменений не вызывает; в крайнем случае может наступить только первая гипофизарная реакция.
Для выполнения реакции берут утреннюю мочу, так как она наиболее насыщена. Ее профильтровывают; если она щелочной или нейтральной реакции, то ее подкисляют уксусной кислотой. Учитывая, что мочу вводят мышам в течение 3 суток, во избежание ее порчи к ней добавляют трикрезол из расчета 1 капля на 25—30 мл мочи. До конца исследования моча сохраняется в холодильнике. В опыт берут 5 инфантильных самок белых мышей. Меньшее количество может не обеспечить проведение реакции, так как, по данным авторов, 15%мышей в ходе опыта погибает из-за токсичности мочи. Кроме того, не все мыши одинаково реагируют на введение мочи. Так, например, положительная реакция иногда отмечается у 1—2 из 5 мышей.
Мыши должны иметь вес 6—8 г и быть не моложе 3 недель, но не старше 5 недель. Более молодые мыши мало чувствительны к гонадотропину и, кроме того, они хуже переносят введение мочи. У более взрослых мышей созревание фолликулов и образование желтых тел может происходить в результате воздействия гонадотропинов их собственного гипофиза.
Инъецируют мочу 3 раза в день в течение 2 дней, причем мыши получают разное количество мочи (0,2; 0,25; 0,3; 0,4; 0,5 мл). Таким образом, за 6 инъекций доза исследуемой мочи составляет соответственно 1,2; 1,5; 1,8; 2,4; 3,0, мл. Некоторые авторы вводят мочу 2 раза в день по 0,5 мл в течение 3 дней (Е. И. Кватер).
Начиная с 3-го дня рекомендуется брать мазки из влагалища. Это не является необходимым для диагностики беременности, тем не менее может представить интерес, так как в некоторых случаях удается выявить появление только первой гипофизарной реакции. Через 96—100 часов животных убивают эфиром или же обезглавливают и вскрывают брюшную полость. Положительную реакцию легко обнаружить простым глазом или при помощи лупы. В неясных случаях рекомендуют вырезать яичники, промыть их водой и положить на предметное стекло в каплю глицерина. Через 10—15 мин. яичники оказываются побледневшими, и на этом фоне делаются особенно яркими кровяные точки. По данным К. М. Фигурнова, в 10% случаев для решения вопроса приходится прибегать к микроскопическому исследованию. Данные реакции Ашгейм-Цондека дают правильный ответ в 98%. После удаления плодного яйца из организма реакция может быть положительной еще 8—10 дней.
Гормональная диагностика — большое подспорье в решении вопроса, сохранилась ли беременность или она прервалась. Реакция бывает положительной до тех пор, пока ворсинки сохранили связь с материнским кровотоком. Это может иметь место при остатках аборта и при нарушенной внематочной беременности.
Диагностика беременности на взрослых мышах (реакция И. А. Эскина и А. Л. Фрейдовича). По методике этих авторов испытуемую мочу вводят однократно в количестве 1 мл взрослым самкам белых мышей весом 18—20 г; в опыт берут 5 мышей. Через 48 часов мышей забивают и исследуют яичники. Реакция считается положительной, если у 3 из 5 мышей в фоликулах яичника обнаруживаются отчетливые кровяные точки. По данным авторов, точность диагностики беременности на взрослых мышах не уступает реакции на инфантильных мышах. Но последняя имеет преимущество в том отношении, что ответ получается уже через 48 часов, а не через 96—100 часов, как при использовании инфантильных животных. Кроме того, однократное введение мышам мочи значительно упрощает реакцию.
Реакция Фридмана. В качестве биологического теста для диагностики беременности Фридман предложил использовать половозрелых крольчих. У них не происходит спонтанного лопания созревших фолликулов и образования желтых тел. Эти процессы совершаются после покрытия крольчих самцом в результате рефлекторного возбуждения передней доли гипофиза и выделения гонадотропных гормонов. После гипофизэктомии, произведенной в первые часы после спаривания, лопания фолликулов не происходит. Фридман, вводя в ушную вену крольчихи 24 мл мочи беременной женщиныв течение 2 суток (по 4 мл 6 раз), обнаружил через 48 часов кровоизлияния в фолликулах и начало образования желтых тел.
В настоящее время для диагностики беременности используются и не полностью созревшие крольчихи. Наиболее пригодными для опытов считают крольчих весом 1200—1800 г. Их относят к созревающим животным. Половозрелыми считаются крольчихи, имеющие вес от 1800 до 2000 г, вполне зрелыми — от 2000 г и выше. Для опыта берут самок, содержащихся отдельно от самцов. Для реакции нужна утренняя моча; ее профильтровывают и вводят в ушную вену крольчихи в количестве 10—20 мл. Введение мочи в вену нужно делать медленно, тогда она хорошо переносится животными. Можно вводить мочу порциями по 4 мл 3 раза в день в течение 2 дней. Некоторые авторы рекомендуют вводить мочу не внутривенно, а подкожно однократно 25—30 мл (К. М. Фигурнов). Такой метод введения мочи на точности реакции не отражается, а преимущества его очевидны: он не приводит к гибели животных вследствие токсического действия мочи, к тому же технически легче выполним.
Через 48 часов после инъекции мочи крольчиху под эфирным наркозом, с соблюдением правил асептики и антисептики, подвергают чревосечению, делая продольный разрез брюшной стенки по средней линии, и осматривают половые органы. В случае положительной реакции в яичниках обнаруживают такие же изменения, как в половом аппарате у мышей, но они выражены более отчетливо: на поверхности яичника выпячиваются крупные фолликулы с кровоизлияниями в них, окрашенные в темно-вишневый цвет. Брюшную рану зашивают послойно: на брюшину и мышцы накладывают непрерывный кетгутовый шов, на кожу — шелковые швы. Одну и ту же крольчиху можно использовать для постановки реакции 5—6 раз. В случае отрицательной реакции крольчиху можно брать для очередного опыта через 1,5—2 недели; в случае положительной реакции — не раньше чем через 1месяц. Реакция Фридмана дает правильный ответ в 98—99%.
Диагностика беременности на самцах лягушек (реакция Галли-Майнини). Как уже было сказано, гонадотропные гормоны гипофиза не являются специфическими половыми гормонами, а регулируют функции половых желез обоего пола. На половую систему самцов лягушек гипофизарные и хориальные гонадотропины действуют идентично, вызывая выделение сперматозоидов в клоаку. На этом принципе и основана реакция Галли-Майнини.
Согласно исследованиям многих авторов, эта реакция нисколько не уступает реакции Ашгейм-Цондека и Фридмана, давая правильный ответ почти в 100% случаев. Постановка этой реакции обходится очень дешево, так как не требует наличия вивария и специального ухода за лягушками. Их содержат в прохладном полутемном помещении в посуде с небольшим количеством воды и поставленной с небольшим наклоном так, чтобы часть дна не была покрыта водой. Воду нужно менять ежедневно. При таких условиях лягушки могут долго жить без пищи. За несколько часов перед тем как поставить опыт лягушек нужно принести в то помещение, где будет проводиться реакция для того, чтобы они адаптировались к температуре нового помещения.
Из лягушек, обитающих в Советском Союзе, наиболее чувствительны к хориальному гонадотропину озерные лягушки (Rana ridibunda), менее чувствительны зеленые жабы (Bufo viridis) и обыкновенные жабы (Bufo bufo), и наименее чувствительны прудовые лягушки (Rana esculenta). Наиболее подходящими для постановки реакции являются озерные лягушки, которые проявляют реактивность к хориальному гонадотропину в течение целого года. В опыт берут половозрелых самцов весом от 50 до 75 г и длиною 6—7,5 см. Самцы лягушек отличаются от самок тем, что у них на первом пальце передних лап имеется большая мозоль.
Реакцию ставят па 2 лягушках. У самцов лягушек обычно в содержимом клоаки сперматозоидов не бывает, за исключением времени размножения. Тем не менее перед постановкой реакции нужно исследовать содержимое клоаки на наличие сперматозоидов. Для этого глазной пипеткой набирают из клоаки каплю жидкости, наносят ее на предметное стекло и рассматривают под микроскопом. Если обнаруживают сперматозоиды, то такую лягушку из опыта исключают.
Свежую утреннюю мочу в количестве 3—5 мл впрыскивают в лимфатический мешок, расположенный под кожей спины, направляя иглу параллельно спине. Мочу вводят без предварительного фильтрования и обработки. При наличии в ней примеси мочу предварительно следует профильтровать.
Через 2 часа после введения мочи при положительной реакции в клоаке обнаруживают сперматозоиды. Их рассматривают под микроскопом при малом увеличении в слегка затемненном поле зрения. Реакция считается положительной, если сперматозоидов много и большая их часть подвижна. Если количество их невелико (2—5), то реакцию необходимо повторить.
Лягушек для реакции можно использовать многократно, однако нежелательно пускать в опыт животных, реагировавших положительно
5—6 раз, так как чувствительность к хориальному гонадотропину у них постепенно снижается. В случае положительной реакции следующий опыт можно ставить на этой лягушке не раньше чем через неделю; при отрицательном результате — через 2—3 дня.
Реакция на лягушках-самцах выгодно отличается от других биологических проб быстротой и простотой техники, может быть произведена в любой обстановке, доступна каждому практическому врачу.